SDS PAGE ja geelielektroforeesi

SDS PAGE vs. geelielektroforeesi

Elektroforeesia voidaan käyttää määrittämään kohteen massan yleensä proteiinille ja deoksiribonukleiinihapolle (DNA). DNA: n säike, joka otetaan käyttöön kemikaaleihin, voi nopeuttaa tai hidastaa tietoprosessia. Tunnetun massan DNA-merkkejä käytetään määrittämään esineiden koon, kun elektroforeesi on päättynyt. Elektroforeesi on todennäköisesti eniten käytetty työkalu molekyylibiologeille ja biokemisteille.

Tässä menetelmässä käytetään yleisesti kahden tyyppisiä elektroforeesia. Nämä ovat natriumdodekyylisulfaattipolyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE) ja natiivi geelielektroforeesi.

SDS-PAGE on ei-selektiivinen geelielektroforeesimenetelmä, jota käytetään sellaisilla aloilla kuin biokemia, forensika, biologia ja genetiikka proteiinin erottamiseksi elektroforeettisesta liikkuvuudestaan. SDS on anioninen pinta-aktiivinen aine, jota voidaan käyttää avustamaan solujen lyysissä DNA: n uuttamisen aikana ja proteiinien erottamiseksi SDS-PAGE: ssa. Elektroforeesin aikana proteiinin seos ensin liukenee SDS-liuoksessa. Sitten substraattia, jota kutsutaan merkaptoetanoliksi, levitetään disulfidisidosten poistamiseksi, jotta proteiini muuttuu lineaariseksi. Sitten elektroforeesi aloitetaan. Tulokset tuottaisivat kaksi molekyylijäämää, joista yksi on SDS-PAGE.

SDS-PAGE: n puuttuminen ei ole ongelma, koska geelielektroforeesia voidaan edelleen tehdä vain siten, että proteiinit eivät menetä koko sekundaarista ja tertiääristä rakennetta eivätkä avaudu yleisesti suoriksi sauvoiksi.

Samaan aikaan natiivi geelielektroforeesi käyttää geeliä antikonvektiivisena väliaineena. Sitä käytetään yleensä biologisten makromolekyylien kuten DNA: n, ribonukleiinihapon (RNA) ja proteiinin erottamiseen. Sitä voidaan käyttää myös nanopartikkeleiden erottamiseen.

Natiivissa geelielektroforeesissa käytetään kahta päägeeliä, nimittäin:

Agaroosigeeli, jota käytetään suuremmille molekyyleille. Tämä geeli ei tunnista pieniä eroja kahden molekyylibändin välillä. Sitä käytetään myös yksinomaan DNA: n erottamiseen. Agaroosigeelin visualisointi suoritetaan etidiumbromidin sekoituksella.

Polyakryyliamidigeeli, jota käytetään pienempiin molekyyleihin. Tämä geeli tunnistaa molekyylibändien väliset erot. DNA: n lisäksi se voi myös erottaa proteiineja.

Yhteenveto:

1.SDS-PAGE on ei-selektiivinen geelielektroforeesimenetelmä, jota käytetään aloilla kuten biokemia, forensika, biologia ja genetiikka erottaa proteiini elektroforeettisesta liikkuvuudestaan, kun taas geelielektroforeesia käytetään yleensä biologisten makromolekyylien kuten DNA: n, ribonukleiinihappo (RNA) ja proteiini. Sitä voidaan käyttää myös nanopartikkeleiden erottamiseen.

2.Natiilielektroforeesilla on kaksi tyyppiä, nimittäin: agaroosigeeli ja polyakryyliamidigeeli.